萘夫西林鈉原料藥（批號：20080203、20080804,，純度：90％）,、注射用萘夫西林鈉（即萘夫西林鈉注射用無菌粉末，批號：20080401,、20080903,，規(guī)格：每瓶1.0g）均由華藥集團山西博康藥業(yè)有限公司提供；萘夫西林鈉USP對照品（美國藥典會提供,，批號：10G229,，含量：90.1％）；萘夫西林鈉工作對照品（河北省藥品檢驗所標定,，批號：20081115,，含量：90.0％）；醋酸鈉為分析純,，乙腈為色譜純,。

2方法與結果2.1溶液的制備2.1.1含量測定用溶液。取萘夫西林鈉原料藥或注射用無菌粉末適量,，精密稱定,，加水溶解并稀釋制成每1mL中含0.2mg的溶液，作為供試品溶液a,；另取萘夫西林鈉工作對照品適量,，同法制備，作為對照品溶液,。

2.1.2有關物質測定用溶液,。取萘夫西林鈉原料藥或注射用無菌粉末適量，精密稱定,，加水溶解并稀釋制成每1mL中含1.0mg的溶液,，作為供試品溶液b；精密量取1mL,，置于100mL容量瓶中,，加水稀釋至刻度，搖勻,，作為對照溶液,。

2.2色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗色譜柱：PhenomenexGeminiC19（150mm×4.6mm，5μm）,、依利特SinoChromC19（150mm×4.6mm,，5μm）；流動相：0.05mol？L－1醋酸鈉溶液（用稀醋酸調節(jié)pH值至7.5）-乙腈（75∶25）,；檢測波長：230nm,；進樣量：10μL.

取0.2mgmL－1的萘夫西林鈉對照品溶液進樣測試，按萘夫西林峰計算理論板數(shù)為3400,，拖尾因子為0.97.溶劑（水）,、對照品溶液、由萘夫西林鈉原料藥制備成的供試品溶液a,、b的色譜結果詳。

2.3線性關系考察精密稱取萘夫西林鈉工作對照品適量,，用水溶解并稀釋制成含萘夫西林0.038,、0.057、0.095,、0.19,、0.38、0.76,、1.14mg,？

mL－1的系列濃度溶液，分別取10μL進樣測定,，以峰面積（Y）對濃度（X）繪制標準曲線,，計算回歸方程和相關系數(shù)。結果,，回歸方程：Y＝7.915×107X－6.291×103（r＝0.9999）,，萘夫西林檢測濃度線性范圍為0.04～1.14mgmL－1。

2.4專屬性考察對原料藥分別進行酸,、堿,、熱、光,、氧化破壞試驗,，以獲得降解產(chǎn)物，考察其與主峰的分離情況,，結果降解產(chǎn)物峰與主峰分離完全,，雜質峰之間亦有較好的分離。

2.5回收率試驗分別精密稱取注射用無菌粉末20,、25,、30mg各3份，置于250mL容量瓶中,，精密加入等量的萘夫西林鈉工作對照品,，加水溶解并稀釋至刻度，制成含量測定濃度80％、100％,、120％的溶液,，搖勻，進樣測定,。按外標法以峰面積計算回收率,。可見,，萘夫西林的平均回收率為99.5％,，RSD＝0.60％（n＝9），表明方法準確度良好,。

2.6重復性試驗取同一批供試品,，重復取樣6次，依法測定其含量,，結果含量的RSD＝0.44％,，表明方法重復性好。

2.7穩(wěn)定性試驗精密稱取萘夫西林鈉原料藥20mg,，置于100mL容量瓶中,，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻,，在室溫下放置0,、2、4,、6,、8h后進樣，測定峰面積,；同時與以枸櫞酸溶液（pH7.0）為溶劑制備的樣品溶液對比,。結果2種溶劑制備的樣品溶液8h峰面積的RSD分別為0.32％、0.13％,，表明2種溶液均比較穩(wěn)定,。

2.8檢測限測定取萘夫西林鈉工作對照品適量，用水溶解并稀釋制成系列濃度的溶液進樣,，記錄色譜圖,。以信噪比S/N為3時，注入儀器的量確定萘夫西林的檢測限為2ng.

2.9重現(xiàn)性考察不同實驗室分別采用不同型號HPLC儀及不同廠牌色譜柱對樣品進行測試,，結果主峰與相鄰雜質峰均分離完全,，含量及有關物質測定結果基本一致。

2.10樣品測定2.10.1主藥含量測定,。取原料藥及注射用無菌粉末各2批,，按“2.1.1”項下方法制備,，取供試品溶液和對照品溶液各10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖,。按外標法計算含量,，結果見。

2.10.2有關物質測定,。取原料藥及注射用無菌粉末制劑各2批,，按“2.1.2”項下方法制備，取供試品溶液和對照溶液各10μL注入液相色譜儀,，記錄色譜至主成分峰保留時間的4倍,。

按不加校正因子的主成分自身對照法計算雜質總和。

3討論本文參考USP30版中萘夫西林鈉原料藥及其注射用無菌粉末的含量測定方法,，以0.05mol,？L－1醋酸鈉溶液（用稀醋酸調節(jié)pH值為7.5）-乙腈為流動相，并對流動相比例,、溶劑、檢測波長,、測定濃度進行了選擇,。

3.1流動相比例的調整為保證主峰與可能產(chǎn)生的降解產(chǎn)物峰的分離以及雜質峰之間的分離，將乙腈比例由30％降為25％,，結果各物質分離較好,。

3.2溶劑的選擇USP30版采用枸櫞酸溶液（pH7.0）作為溶劑，本法擬用水作為溶劑,。經(jīng)過對2種溶液的8h穩(wěn)定性進行考察,，結果表明二者均比較穩(wěn)定，故選用經(jīng)濟易得,，溶解性,、穩(wěn)定性均能滿足分析要求的水作為溶劑。

3.3檢測波長的選擇取萘夫西林鈉工作對照品,，用水溶解并稀釋成適當濃度,，在200～350nm波長范圍內掃描，結果萘夫西林鈉在227nm波長處有最大吸收,，USP30版采用的檢測波長為254nm接近吸收谷,，而筆者的研究發(fā)現(xiàn)萘夫西林鈉在227nm波長處的吸收系數(shù)較254nm波長處的吸收系數(shù)高10余倍；取熱,、酸,、堿、光,、氧化破壞的樣品溶液分別進樣,，用二極管陣列檢測器（DAD）檢測主要有關物質的光譜特征，結果主要降解產(chǎn)物分別在224～229nm波長處有最大吸收。因此在230nm波長處主藥及有關物質均有較高檢測靈敏度,，可作為含量及有關物質的檢測波長,。

3.4測定濃度的選擇根據(jù)色譜峰響應的線性范圍以及為了微量雜質的有效檢出，筆者擬定主藥含量和有關物質的測定濃度分別為0.2,、1.0mg,？mL－1，進樣量為10μL.

3.5記錄時間的選擇降解產(chǎn)物中強保留成分的出峰時間約為主峰保留時間的3.5倍,，故確定有關物質色譜記錄時間為主峰保留時間的4倍,。